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                   甲型H1N1流感病毒(2009)抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)

使          

产品名称

通用名:甲型H1N1流感病毒(2009)抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)

英文名:Enzyme-linked Immunosorbent Assay Kit for Detection of Antibodies to Influenza Virus A H1N1(2009)

汉语拼音:jiaxing H1N1 liugan bingdu (2009) kangti zhenduan shijihe (meilian mianyifa)

    】96T/盒

预期用途

本试剂盒主要用于检测人或动物血清或血浆中抗甲型H1N1流感病毒(2009)抗体(包括IgG和IgM)。

①检测特异性抗体,了解疫苗的免疫效果,判定接种甲型H1N1流感病毒疫苗者是否产生具有保护力的抗体;

②检测急性期和恢复期病人双份血清或血浆,如恢复期特异性抗体较急性期增高4倍以上,即可诊断为甲型H1N1流感病毒感染;

③用于流感病毒流行性监测,检测一个地区的人群中甲型H1N1抗体阳性率,预测该病毒在此地区爆发的可能性;

④用于流感疫苗生产中的效力实验,检测小鼠体内抗体的产生情况,代替传统的血凝抑制实验,使实验时间极大的缩短。

本试剂盒仅限于体外诊断用。

检测原理

反应板中已包被灭活的甲型H1N1流感病毒纯化抗原,加入待检血清或血浆,在孔中经过孵育后,若该血清或血浆中含有特异性抗体,则该抗体与反应孔中的抗原结合,再与酶标甲型H1N1流感病毒抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,加入TMB底物产生显色反应,根据OD值判断特异性抗体的存在。

主要组成成份

1、预包被板………………………12孔×8               2、酶结合物……………………  8ml×2

3、稀释液……………………  40ml×1                4、20×浓缩洗涤液……………  40ml×1

5、阳性对照……………………0.5ml×1                6、阴性对照……………………  0.5ml×1

7、封口胶………………………2张                    8、自封袋………………………  1个

9、底物A ………………………8ml×1                10、底物B ………………………8ml×1

11. 终止液………………………8ml×1                 12、说明书………………………  一份

注:不同批号的试剂盒各组分可互换使用。

储存条件及有效期

1、2-8℃储存。

2、试剂盒有效期自检定合格之日起1年。

所需仪器

水浴或恒温箱,酶标仪。

样本要求

新鲜血清或血浆样本,经3000rpm离心5分钟后,取上清进行检测。

实验前准备

1、将试剂盒平衡至室温(18-25°C)。

2、20×浓缩洗涤液用纯化水按1:19体积比稀释成洗涤工作液。

检测步骤

1.样本稀释及加样(可根据检测目的选择定性检测或半定量检测):

定性检测:用稀释液将待检血清或血浆按1:100稀释,如297μl稀释液+3μl样品,稀释液由绿色变为蓝色。阴性、阳性对照按同样方法稀释。样本检测孔每孔分别加已稀释样本100μl。同时设阴性、阳性对照各两孔,空白对照一孔,取阴性、阳性对照各100μl分别加入反应孔内,空白对照孔仅加入100μl稀释液。

半定量检测:用稀释液将待检血清或血浆按1:100稀释,充分混匀后取150μl连续倍比稀释至1:3200  (可根据抗体浓度高低适当增加或减少稀释倍数,倍比稀释不可以在反应板内进行)。阴性、阳性对照按1:100稀释。样本检测孔每孔分别加各个稀释度的样本100μl。阴性和阳性对照及空白孔设立和加样与定性检测相同。

以下步骤定性检测和半定量检测完全相同。

2.封板膜密封反应板,37℃避光反应30分钟后甩去孔内液体,每孔注满洗液,静置30秒后甩去,拍干。同样方法再洗涤2次,拍干。

3.加酶反应:除空白对照孔外其余每孔各加酶结合物100μl,37℃避光反应30分钟后甩去孔内液体,如步骤2洗涤5次,拍干。

4.显色反应:每孔各加底物A和底物B各50μl,混匀,37℃下避光显色15分钟。各加终止液一滴,混匀,终止反应(加终止液后蓝色会变为黄色)。

结果判断

1.以空白对照孔调零,用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取OD值。阳性对照的OD值应大于0.5,阴性对照的OD值应小于0.2,否则实验应重做。

2.判定结果

定性检测:

计算阴性对照的平均OD值,当阴性对照OD值低于0.05时按0.05计算。待检孔OD值大于阴性对照平均值2.1倍者判定为阳性,否则为阴性。

半定量检测:

待检样品所含抗甲型H1N1抗体效价为样品连续稀释孔中判定为阳性孔的最高稀释倍数的倒数。阳性孔结果判定方法与定性检测相同。例如,样品按1:100、1:200、1:400、1:800和1:1600稀释,阴性OD值平均值为0.056,大于0.056×2.1,即0.118判定为阳性,该样品800倍稀释的样品孔OD值为0.19,1600倍稀释的样品孔OD值为0.08,则该样品的效价判定为1:800。

注意事项

  1. 应严格按照说明书要求进行操作。
  2. 试剂应放置2~8℃储存,使用前应恢复到室温。
  3. 检测样品应视为具有传染性,操作人员检测时应佩戴口罩和一次性PE手套。
  4. 为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。
  5. 检测前,样品应充分混匀后加入反应孔内。
  6. 酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
  7. 请于试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。
  8. 试剂盒中阳性标准品以健康人血清为原材料制备,已经甲肝、乙肝、艾滋、梅毒等常规方法检测为阴性,但仍应以具有潜在感染性物质对待。
  9. 20×浓缩洗涤液若有结晶形成,使用前应于37℃中溶解后再稀释。
  10. 微生物污染的样本可能会影响结果,应重新采集样本,并重复检测。
  11. 为提高试验的可比性建议使用仪器判读结果,并对阴性对照测复孔以减少误差。

生产企业

企业名称:长春博德生物技术有限责任公司       

                                                 

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