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血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)

使用说明书

产品名称

通用名:血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)

英文名:Solid-phase Coombs Test Kit for Platelet Antibody Assay

    】96T/盒

预期用途

血小板抗体可引起血小板输注无效症、输血后紫癜、自身免疫性血小板减少症及新生儿同种异体免疫血小板减少症等多种疾病。

本试剂盒主要用于检测血小板抗体及血小板输注前交叉配型,辅助诊断临床血小板免疫性疾病。

本试剂盒仅限于体外诊断用。

检测原理

反应板中已包被抗人血小板单克隆抗体,血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。加入血清或血浆,在孔中经过孵育后,若该血清或血浆中含有血小板抗体,则该抗体与反应孔中的血小板单层结合,未结合的成分通过洗涤被去除。加入抗人IgG及人IgG致敏红细胞(指示红细胞),经离心后指示红细胞通过抗人IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合,因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔底部表面。而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。

主要组成成份

试剂盒包含的组分:

1.反应板(8孔×12):反应孔内已包被鼠抗人血小板单克隆抗体。     

2.低离子强度溶液(12ml×1):主要成分为氯化钠及甘氨酸,含0.1%叠氮钠。

3.抗人IgG(6ml×1):效价为32-64,含1%牛血清白蛋白及0.1%叠氮钠。

4.25×浓缩洗涤液(20ml×1):主要成分为氯化钠及吐温-20,含0.1%叠氮钠。

5.阳性对照(2ml×1):含有抗人血小板抗体及0.1%叠氮钠。      

6.阴性对照(2ml×1):不含抗人血小板抗体,含0.1%叠氮钠。

7.封口胶(2张)         

8.自封袋(1个)

9.说明书(1份)

注:不同批号的试剂盒各组分可互换使用。

试验需要但本试剂盒不包含的组分:

指示红细胞:长春博德生物技术有限责任公司生产的血小板抗体检测用指示红细胞(固相凝集法)。

储存条件及有效期

1.2-8℃储存。

2.试剂盒有效期自检定合格之日起1年。

3.试剂盒开封后,2-8℃保存,6个月内使用。

 

 

g/r

适用仪器

平板式离心机。离心力和离心转数的换算公式为:rpm=299    (r为离心半径,单位:cm)。

样本要求

血清或血浆(EDTA或枸橼酸钠抗凝)样本,经3000rpm离心5分钟后,取上清进行检测。样本4℃可保存7天,若需长期保存应-20℃冻存。发生溶血、黄疸及高脂的样本不能用于检测。

实验前准备

1.将试剂盒平衡至室温(18-25℃)。

2.25×浓缩洗涤液用蒸馏水按1:24体积比稀释成洗涤工作液。

检测步骤

(一)抗体检测

1.制备血小板悬液:可将商品化的冻干血小板稀释后直接使用。也可采用三人份等比例混合O型血小板悬液(将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释后混合;或采血当天8小时内EDTA或枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10分钟,取上层2/3富血小板血浆混合),血小板悬液的适宜浓度为50-150×109/L。血小板悬液应贮于塑料容器中,20-25℃保存并在8小时内进行检测。

2.根据检测量取出反应板条,标记患者、阳性对照及阴性对照孔,未使用的板条应储存于自封袋中,加入干燥剂密封后,2-8℃储存。

3.向反应孔中加入1滴(50μl)上述血小板悬液,轻摇反应板约10秒钟。

4.用平板离心机将反应板以50g离心5分钟,使血小板固定在反应孔底部。

5.倒出反应孔中的液体,并用滴管滴加洗涤工作液清洗3次,洗涤过程中轻摇微孔板,然后再轻轻甩掉洗涤液。最后一次洗涤后将反应板倒置于吸水纸上吸干残余液体(切勿拍打)。

6.立即向每个反应孔中加入2滴(100μl)低离子强度溶液,并分别向相应孔中加入1滴(50μl)患者样本、阳性对照及阴性对照。低离子强度溶液将由紫色变为天蓝或青绿色,如仍为紫色则说明可能漏加样本。

7.将反应孔用封口胶封好,轻摇混匀后置于湿盒中37℃水浴孵育30分钟。

8.取出已孵育完毕的反应板,弃去封口胶。按步骤5洗涤反应板5次。

9.立即加入1滴(50μl)抗人IgG及1滴(50μl)指示红细胞,轻轻振荡混匀。

10.将反应板以200g离心5分钟。

11.将检测孔与对照孔的结果进行比较,判读并记录检测结果。

(二)交叉配型

1.制备与受者ABO同型的供者血小板悬液:将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释;或采血当天8小时内EDTA或枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10分钟,取上层2/3富血小板血浆。血小板悬液的适宜浓度为50-150×109/L。血小板悬液应贮于塑料容器中,20-25℃保存并在8小时内进行检测。

2.根据检测量取出反应板条,标记供者、阳性对照及阴性对照孔,未使用的板条应储存于自封袋中,加入干燥剂密封后,2-8℃储存。

3.向反应孔中加入1滴(50μl)相对应的供者血小板悬液,对照孔中加入任一供者血小板悬液均可,轻摇反应板约10秒钟。

4.用平板离心机将反应板以50g离心5分钟,使血小板固定在反应孔底部。

5.倒出反应孔中的液体,并用滴管滴加工作洗涤液清洗3次,洗涤过程中轻摇微孔板,然后再轻轻甩掉洗涤液。最后一次洗涤后将反应板倒置于吸水纸上吸干残余液体(切勿拍打)。

6.立即向每个反应孔中加入2滴(100μl)低离子强度溶液,并向供者孔中加入1滴(50μl)受者样本,对照孔中相应加入阳性对照及阴性对照。低离子强度溶液将由紫色变为天蓝或青绿色,如仍为紫色则说明可能漏加样本。

7.将反应孔用封口胶封好,轻摇混匀后置于湿盒中37℃水浴孵育30分钟。

8.取出已孵育完毕的反应板,弃去封口胶。按步骤5洗涤反应板5次。

9.立即加入1滴(50μl)抗人IgG及1滴(50μl)指示红细胞,轻轻振荡混匀。

10.将反应板以200g离心5分钟。

11.将检测孔与对照孔的结果进行比较,判读并记录检测结果。

检测结果的解释

阳性结果:指示红细胞平铺在反应孔底部表面;若指示红细胞只结合到部分孔底,并且结合的区域比阴性对照大为弱阳性。表明患者血清或血浆中含有血小板抗体;或血小板交叉配型不合。

阴性结果:指示红细胞在反应孔底部中央形成红细胞聚集。表明患者血清或血浆中不含血小板抗体;或血小板交叉配型相合。

 

                                          

 阳性   弱阳性   阴性                                                             

如果结果可疑,或阳性对照和/或阴性对照没有出现正确结果,则必须重新检测。

注意事项

1.检测脂类含量过高的样本,微生物污染的样本及血液没有完全凝固的血清样本可能会有错误结果。

2.25×浓缩洗涤液若有结晶形成,使用前应于37℃中溶解后再稀释。洗涤过程中须滴加洗涤工作液,水流剧烈冲击可能会造成血小板单层的破坏而导致错误结果。

3.所有试剂使用前应充分摇匀,加样时滴管应垂直滴加。

4.指示红细胞若出现溶血或染菌可能会造成错误结果。

5.所有血液制品必须以具潜在的感染性对待。没有任何已知的检测方法能使人确信源于人血的产品不能传播感染因子。本试剂盒的原材料符合国家食品药品监督管理局现行的强制性检测标准。

参考文献

1.Rachel JM,Sinor LT,Tawfek OW,etal. A solid phase red cell adherence test for platelet crossmatching[J].Med Lab Sci,1985,42:194-195.

2.Lown J A, Lovey J G. Evalution of a solid phase red cell adherence technique for platelet antibody screening[J]. Transfusion Medicine,1991,1(3):163-167.

生产企业

企业名称:长春博德生物技术有限责任公司      

 

 

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